摘要：目的　观察宫颈癌组织中人类黑色素瘤相关抗原Ａ３（ＭＡＧＥＡ３）的表达变化，分析其与肿瘤临床病理参数及预后的关系。方法　收集宫颈癌组织７６例、宫颈上皮内瘤变（ＣＩＮ）组织４０例、正常宫颈组织标本２５例，采用免疫组化ＳＰ法检测ＭＡＧＥＡ３，分析ＭＡＧＥＡ３表达与患者年龄、ＦＩＧＯ分期、组织病理学分级、淋巴结转移及阴道残端癌累及的关系。收集７０例宫颈癌患者的术后随访资料，采用ＫａｐｌａｎＭｅｉｅｒ生存曲线分析ＭＡＧＥＡ３表达与患者预后的关系。结果　宫颈癌组织、ＣＩＮ组织、正常宫颈组织中ＭＡＧＥＡ３阳性表达率分别为５３．９４％、７．５０％、０，组间两两相比，Ｐ均＜０．０５。ＦＩＧＯ分期Ⅱａ１期宫颈癌组织中ＭＡＧＥＡ３阳性表达率高于Ⅰ期者（Ｐ＜０．０５）。病理分级为Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３的宫颈癌组织中ＭＡＧＥＡ３阳性表达率逐渐增高（Ｐ均＜０．０５）。有淋巴结转移的宫颈癌组织中ＭＡＧＥＡ３阳性表达率高于无淋巴结转移者（Ｐ＜０．０５）。ＭＡＧＥＡ３低表达组患者５年生存率为７８．１％（２５／３２），高表达组患者５年生存率为４４．７％（１７／３８），两者相比，Ｐ＜０．０５。结论　宫颈癌组织中ＭＡＧＥＡ３阳性表达率高于ＣＩＮ组织和正常宫颈组织；ＭＡＧＥＡ３高表达可能与宫颈癌的发生发展及不良预后密切相关。　　
关键词：宫颈癌；宫颈上皮内瘤变；人类黑色素瘤相关抗原
　　子宫颈癌是常见的恶性肿瘤之一，发病趋于年轻化。随着宫颈病变早期筛查的普及，越来越多的宫颈癌得以早发现早治疗，其预后也得到很大改善，但宫颈癌发病机制目前仍不清楚。宫颈上皮内瘤变（ＣＩＮ）是一组发生于宫颈上皮的癌前病变，与宫颈癌的发生密切相关。随着分子生物学的迅速发展，学者们逐渐认识到宫颈病变的形成和演变是多基因共同作用的复杂进程。人类黑色素瘤相关抗原Ａ３（ＭＡＧＥＡ３）作为ＭＡＧＥＡ基因家族的一员，除在睾丸和胚盘组织中表达外，在其他正常组织也有微弱表达。研究显示，ＭＡＧＥＡ３在肾癌、膀胱癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、黑色素瘤、胃癌等肿瘤组织中高表达，关于ＭＡＧＥＡ３在子宫颈癌中表达的研究尚少。本研究观察了宫颈癌组织中ＭＡＧＥＡ３的表达变化，并分析其与肿瘤临床病理参数及预后的关系。

１　材料与方法

１．１　临床资料　２００８年６月～２０１１年６月河北大学附属医院手术切取并制作的宫颈癌组织标本７６例、ＣＩＮ组织标本４０例、正常宫颈组织标本２５例。宫颈癌患者年龄３０～６７岁、中位年龄４３岁，ＦＩＧＯ分期Ⅰａ～ｂ期５２例、Ⅱａ期２４例，鳞癌６０例、腺癌１６例，病理分级为高分化（Ｇ１）２４例、中分化（Ｇ２）３２例、低分化（Ｇ３）２０例，无淋巴转移６１例、有淋巴转移１５例，所有病例均经病理诊断证实，排除患其他恶性肿瘤疾病或急慢性疾病者，患者术前均未进行放化疗；截止到２０１６年６月，共７０例患者获得随访，按月数计算生存时间。ＣＩＮ患者年龄２６～５６岁、中位年龄３８岁。正常宫颈组织选自良性子宫肌瘤行子宫全切手术标本，患者年龄３０～６１岁、中位年龄５２岁。三组标本来源患者年龄资料具有可比性。本研究方案获医院伦理委员会批准。

１．２　ＭＡＧＥＡ３检测方法　采用免疫组化ＳＰ法。将各组石蜡切片经常规脱蜡和水化后，以枸橼酸盐缓冲液（ｐＨ６．０）进行抗原修复１３ｍｉｎ，冷却至室温；依次加入过氧化酶阻断液、适量辣根酶标记的链霉卵白素工作液和ＤＡＢ显色剂，显微镜下观察染色情况；自来水冲洗，苏木素复染，脱水，透明，中性树胶封片；以已知阳性组织作阳性对照，以ＰＢＳ代替一抗作阴性对照。每张切片在高倍镜（４００×）下随机挑选５个视野（每个观察视野范围内的细胞数量≥２００个），结合染色强度和阳性细胞百分比综合判定结果。染色强度为不着色计０分，浅黄色计１分，棕黄色计算２分，棕褐色计３分；阳性细胞百分比＜５％计０分５％～＜２５％计１分，２５％～＜５０％计２分，≥５０％计３分；将上述两项得分相加，０～２分为蛋白表达阴性，３～４分为弱阳性，５～６分为强阳性，３～６分为蛋白表达阳性；０～２分为低表达，３～６分为高表达。所有切片由两名资深病理科医生双盲阅片。

１．３　统计学方法　采用ＳＰＳＳ１９．０统计软件进行分析。计数资料组间比较采用¯ｘ±ｓ检验或Ｆｉｓｈｅｒ确切概率法；等级资料比较采用非参数检验；预后分析采用ＫａｐｌａｎＭｅｉｅｒ生存分析法。Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。

２　结果

２．１　宫颈癌组织、ＣＩＮ组织、正常宫颈组织中ＭＡＧＥＡ３表达比较　

图１　宫颈癌组织、ＣＩＮ组织、正常宫颈组织中ＭＡＧＥＡ３的表达

２．２　ＭＡＧＥＡ３表达与宫颈癌临床病理参数的关系　

２．３　ＭＡＧＥＡ３表达与宫颈癌患者预后的关系
图２　ＭＡＧＥＡ３低表达与高表达的宫颈癌患者的生存曲线

３　讨论　　自１９９１年ＶａｎｄｅｒＢｒｕｇｇｅｎ等［８］用基因克隆技术在黑色素瘤细胞株中发现ＭＡＧＥＡ１以来，目前已有６０多种ＭＡＧＥ抗原相继被发现。ＭＡＧＥＡ３基因与其他Ａ亚家族成员一样位于Ｘ染色体的长臂末端即Ｘｑ２８，有３个外显子，第１、２１号外显子很短，第３号外显子很长；有一个开放阅读框（ＯＲＦ）位于第３个外显子，编码一段长３０９～３１９个氨基酸残基的蛋白质。ＭＡＧＥＡ３基因编码的肿瘤抗原ＭＡ２Ｄ分子量为４８ｋＤ，由３１４个氨基酸残基组成。ＭＡＧＥＡ３为染色体上固有存在的原癌基因，其在正常细胞（除睾丸及胎盘组织）中均不表达，在肿瘤发生发展中所起的作用目前尚未完全明确。ＭＡＧＥＡ３在基因转录和特殊转录因子表达调节中起重要作用，机制涉及多条信号通路。研究发现ＭＡＧＥＡ３能通过与ｐ５３结合从而抑制ｐ５３的活性，促进黑色素瘤细胞活化。Ｄｏｙｌｅ等发现ＭＡＧＥ的表达能促进ＫＡＰ１／ｐ５３蛋白复合物的形成，从而促进ｐ５３脱乙酰作用。ＭＡＧＥＡ３在多种肿瘤组织中表达。Ｌｉｕ等研究表明ＭＡＧＥＡ３与肿瘤的发生、发展和预后有密切关系，ＭＡＧＥＡ３为成纤维细胞生长因子受体２（ＦＧＲＦ２）信号通路的靶基因，可负调节ＦＧＲＦ２的表达，并通过调节纤维连接蛋白而控制肿瘤的侵袭和转移。Ｇｕｏ等检测结果显示胶质瘤组织中ＭＡＧＥＡ３蛋白阳性表达率为５１．３％，而正常脑组织中未检测到ＭＡＧＥＡ３，认为ＭＡＧＥＡ３有望作为神经胶质瘤免疫治疗的理想靶点。杨静等发现低度恶性和高度恶性胶质瘤组织中ＭＡＧＥＡ３的阳性表达率分别为３９．１％、７０．４％。宫颈癌的侵袭性很强，有盆腔转移的宫颈癌患者术后复发率高达７０％。本研究结果显示，宫颈癌组织中ＭＡＧＥＡ３的阳性表达率为５３．９４％，显著高于ＣＩＮ组织和正宫颈组织，且ＭＡＧＥＡ３表达与宫颈癌ＦＩＧＯ分期、病理分级和淋巴结转移情况等有关，因此推测，ＭＡＧＥＡ３蛋白在宫颈癌组织中异常高表达，可能参与某些癌基因的激活或抑癌基因沉默，从而导致宫颈癌的发生、发展。早期宫颈癌患者经治疗后预后较好，但仍有１５％～３０％的复发率，５０％的复发患者在治疗后在１年内复发，７５％～８０％的患者在治疗后２年内复发。现已证实，ＭＡＧＥＡ３的高表达与恶性肿瘤不良预后相关，ＭＡＧＥＡ３是多种恶性肿瘤不良预后的独立预测因子。Ｙｉｎ等认为ＭＡＧＥＡ３可作为肾透明细胞癌潜在的不良预后标志物。本研究结果显示，ＭＡＧＥＡ３高表达者５年生存率低于低表达者，与既往相关研究结果一致，说明ＭＡＧＥＡ３阳性表达率越高提示患者预后越差。综上所述，宫颈癌组织中ＭＡＧＥＡ３阳性表达率高于ＣＩＮ组织和正常宫颈组织，ＭＡＧＥＡ３的高表达可能与宫颈癌的发生发展及不良预后密切相关。我们推测ＭＡＧＥＡ３可作为宫颈癌的预后评价指标，并有可能成为宫颈癌的治疗靶点。ＭＡＧＥＡ３在宫颈癌发病中的具体作用机制还有待于进一步研究阐明。