1.VSMCs在动脉硬化研究中的应用是血管壁的主要细胞成分，是血管中膜的唯一细胞类型，也是血管壁组织结构的主要细胞成分之一，维持血管张力。近几年来，随着分子和细胞生物学研究的深入，人们对VSMCs表型(收缩-合成)的转、增殖、迁移、分化、分泌等方面的认识不断加深。血管平滑肌细胞的增殖和迁移会导致VSMCs的表型发生变化，从生理状态下的收缩型到高度增殖的合成型，从中膜迁移到内膜[10，11]。此外，VSMCs的凋亡在不稳定斑块的形成中起着重要作用[12]。VSMCs的特性抗原标记主要包括α-SM-actin.Calponin.Caldesmon等[10]。这个实验使用了最广泛的α-SM-actin免疫组合和VSMCs免疫荧光识别，结果显示95%以上的培养细胞呈阳性，说明VSMCs可以通过这种方法获得高纯度。因此，体外平滑肌细胞的培养为动脉粥样硬化等疾病的发病机制和预防提供了实验基础。X轴：培养天数；Y轴：570nm光密度值Xaxisrepresentulture；Yaxisrepresentultulture；Yaxisrenendat570nm图3血管平滑肌细胞生长曲线Fig3herowthcureVSMCs。

2.组织粘壁法和酶消化法比较大鼠平滑肌细胞菌株主要包括A7r5.A10。商业人性动脉平滑肌细胞可以从ATCC和CascadBiologics购买，但是需要购买专门的平滑肌生长培养基，价格昂贵。原始培养方法主要包括酶消化法和组织块粘壁法。由于血管需求小、成本低、组织来源广泛的优点，广泛应用于血管生物学研究。其组织来源主要包括大鼠胸主动脉[15].大鼠肺动脉[16].兔股动脉[17].全国人民代表大会隐静脉[17].脐动脉[13].冠状动脉[11]等。虽然酶消化方法的培养周期较短，但存在以下缺点：（1）所需的组织量较大，消化酶（如胶原蛋白酶、弹性酶）价格昂贵，因此实验成本较高；（2）酶的作用时间不易掌握，消化酶本身对细胞有毒性，影响壁；（3）操作复杂，污染机会较大。组织块培养方法具有获得平滑肌细胞纯度高、数量多、操作简单的优点，避免了酶消化方法的上述缺陷[18]，本方法的材料数量较少，只有一只老鼠才能满足后续的实验要求。然而，这种方法的缺点是原始的培养周期很长。一般来说，第3~8代VSMCs用于实验。

3.）组织块培养的营养需求：作者选择了20%的胎牛血清进行原代培养，10%的胎牛血清用于代代培养。（2）动物年龄的选择：选择重量为150克的大鼠，因为年轻人的组织块具有更好的增殖潜力，并且原始一代培养的成活率很高。（3）创新VSMCs分离方法：在分离中膜血管平滑肌时，本法采用眼科弯曲镊的反向牵引力去除外膜，同时入血管腔，轻轻擦拭去除内膜，避免刀片刮除内膜层，造成中膜损伤，从而彻底剥离内膜和外膜，最大限度地减少内皮细胞和成纤维细胞的污染。（4）组织块的尺寸和放置间距应适中，以确保从组织块游出后有足够的生长空间，并保持局部细胞密度的均匀性。切割成1毫米的局部块，并将组织块集中在一个瓶子里。组织块不应切割得太小，否则组织块损伤较大，水分容易流失；组织块不应切割得太大，否则不利于细胞从组织块中游出。此外，研究发现，在切割血管块时，将组织切割成多角形将更有利于细胞的自由度。（5）注：在原始训练的早期阶段，当一些组织块漂浮而不靠近墙壁时，可以仔细吸收训练基并将其重新放置到瓶子底部。直立干燥2~3小时后，再次粘贴墙壁，然后将训练瓶转平放，使组织块再次浸入训练液中；在第一代中，细胞对新鲜制备的胰酶更为敏感。添加消化液37℃，消化30秒，即充分消化。随后的代代消化时间控制在2min左右，当间隙增加时，可以立即停止消化。因此，这种实验方法相对成熟，操作简单。经济上，细胞纯度高，是心血管疾病发病机制的理想细胞模型。