摘要:目的 制备时间控制型冬凌草甲素结肠定位柱塞型脉冲释药胶囊｡方法 灌注法制备非渗透性囊体,粉末直接压片法压制柱塞片｡以PEG6000和PEG4000为基质,制备冬凌草甲素滴丸｡用柱塞片将滴丸密封于非渗透性囊体内,制备脉冲释药胶囊｡结果 冬凌草甲素结肠定位柱塞型脉冲释药胶囊在体外呈明显的脉冲释放,当缓释骨架材料HPMCK15M和乳糖的比例为l:8时,可达到结肠定位所需的5—6h释药时滞｡结论 调节柱塞片HPMCK15M和乳糖的比例可获得具有适当释药时滞的冬凌草甲素脉冲释药胶囊｡

关键词:冬凌草甲素;脉冲释药胶囊;结肠定位;释药时滞

    口服结肠定位释药系统(oralcolon—speci6cdrugdeliverysystem,OCDDS)又称结肠迟释制剂,是经口服途径将药物传递到结肠定位释放的一类药物制剂｡药物在胃及小肠内不释放,当转运至结肠时才崩解或溶蚀,故增加结肠部位局部药物浓度,减少药物的全身吸收,适合结肠部位病变(如结肠癌､溃疡性结肠炎等)的治疗¨｡柱塞型脉冲释药胶囊是一种新型脉冲释药装置,由可溶性囊帽､非渗透性囊体､柱塞片和药物组成｡口服后,囊帽迅速溶解,暴露出的柱塞片逐渐溶蚀,完全溶蚀后药物释放出来,达到定时或定位释药的目的｡口服药物到达结肠大约需要5h,如果控制释药时滞为5~6h,则可以实现结肠定位给药｡

    冬凌草甲素是从唇形科香茶菜属植物冬凌草中分离出的一种贝壳杉烯二萜类化合物,水溶性差,其具有较强的抗肿瘤活性,对结肠癌有良好的治疗效果｡所以,本实验先将冬凌草甲素制成滴丸以解决其溶解度问题,保证脉冲释药时间T0.1-0.8较短,达到提高释药部位药物浓度的目的,再制备结肠定位柱塞型脉冲释药胶囊,使该系统具有时间控制型结肠定位释药性质,达到增加结肠部位药物浓度的目的｡

1材料与仪器

    冬凌草甲素对照品(上海融禾医药科技有限公司,批号101215,纯度>98%);冬凌草甲素原料药(西安吴轩生物科技有限公司,批号DLCJSl4030)｡乙基纤维素(EC,中国医药集团上海化学制剂公司,批号FD00128);1号明胶胶囊(广东省潮州市药用胶囊厂);羟丙甲纤维素(HPMcK15M,上海昌为医药辅料技术有限公司);PEG4000､PEG6000(天津市科密欧化学制剂开发中心)｡所用试剂均为分析纯｡

    简易滴丸装置(自制);79-1磁力加热搅拌器(金坛市新航仪器厂);紫外分光光度计(上海棱光技术有限公司);RCz一8A智能药物溶出仪(天津大学精密仪器厂);T—A手电两用单冲压片机(山东医疗器械厂);YD.1片剂硬度测试仪(天津市国铭医药设备有限公司);KQ-100DE数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)｡

2方法与结果

2.1药物分析方法的确定

2.1.1测定波长的选择

    分别称取处方量的主药和辅料,加0.3%十二烷基磺酸钠(sDs)水溶液制成一定浓度,过滤,续滤液分别在200~400nm紫外波长范围内扫描｡结果表明,冬凌草甲素在234nm波长处有最大吸收,而且辅料在此处基本无干扰吸收,故选择234nm作为测定波长｡

2.1.2标准曲线的绘制

    精密称取冬凌草甲素对照品适量,无水乙醇溶解,加0.3%sDs溶液,精密配制成100m∥L的储备液｡量取适量,置于10mL量瓶中,O.3%SDS水溶液稀释,得到系列标准溶液,234nm处测定吸光度｡以吸光度(A)对冬凌草甲素质量浓度(C)进行线性回归,得回归方程A=0.0272c+0.0708,r=0.9999｡结果表明,冬凌草甲素在1.o一20.0mg/L范围内呈良好的线性关系｡

2.1.3回收率试验

    精密称取处方量的80%､100%､120%冬凌草甲素及辅料,制成高､中､低3种质量浓度的溶液,测定吸光度,根据标准曲线方程计算回收率｡结果,低､中､高3种质量浓度的平均回收率分别为98.90%､99.73%､99.21%,RSD为O.29%,符合测定要求｡

2.2冬凌草甲素速释滴丸的制备

    采用滴制法制备滴丸H3,以PEG6000和PEG4000为基质,比例为2:1,药物与基质比例为1:3｡精密称取冬凌草甲素0.30g,加入无水乙醇0.5mL,超声溶解｡称取处方量PEG6000､PEG4000,置于10mL烧杯中,70℃水浴加热熔融｡将冬凌草甲素溶液加入熔融基质中,水浴加热至无醇味,保温静置,除去气泡｡将混合液在70℃下,以30滴/min的速率滴到二甲基硅油中,收集滴丸,擦去表面的冷凝液,粒径为(3.08±O.04)mm(n=3),置于干燥器内保存备用｡采用《中国药典》2010年版二部附录xC中的桨法,对冬凌草甲素原料药与滴丸进行溶出度测定,转速100r/min,温度37℃,溶出介质为900mL0.3%SDS溶液,溶出曲线见图l｡由图可知,冬凌草甲素原料药溶出缓慢,而制成滴丸后溶出速度显著提高｡

图l冬凌草甲素原料药与滴丸的溶出曲线

2.3非渗透性囊体的制备

    采用灌注法制备非渗透性囊体｡精密称取乙基纤维素(ethylecellu—lose,EC)适量,置于锥形瓶中,加入二氯甲烷与无水乙醇的混合溶液,磁力搅拌2h以使Ec溶解｡将Ec溶液灌注于1号普通明胶胶囊体内,使液面与囊口齐平,一定温度下挥去溶剂,然后置于37度水中浸泡,除去外胶囊体,即得非渗透性囊体｡以柔韧性､透明度､厚度为评价指标,对囊体的成形性进行评价,单因素试验设计考察溶剂组成比例､Ec质量浓度､挥发溶剂温度对其的影响｡评价方法和标准为将囊体囊口对折,如囊体脆裂或出现明显折痕,表示柔韧性较差,不出现折痕或折痕不明显则表示柔韧性较好;将囊体平放于40w灯下,距离30cm观察比较囊体的透明度;将囊体剪开,游标卡尺测定囊体囊口和底部尺寸,比较囊体厚度的均匀性,如囊壁厚度超过0.10mm,表示囊壁较厚｡

2.3.1溶剂组成比例对囊体成形性的影响

    固定EC质量浓度为10%,挥发溶剂温度为5℃,应用不同比例的二氯甲烷.无水乙醇(3:1､4:1､5:1)混合溶剂制备非渗透性囊体,考察溶剂组成比例对囊体成形性的影响,结果见表1｡

表1二氯甲烷与无水乙醇的比例对囊体成形的影响

    由于二氯甲烷沸点低,挥发快,故对EC具有良好的溶解性,而无水乙醇沸点较高,挥发慢｡当二氯甲烷-无水乙醇的比例为3:l时,无水乙醇含有量最高,囊体柔韧性差;5:1时,二氯甲烷含有量最高,挥发速度最快,但EC质量浓度变大,导致囊体底部较厚｡由表1可知,当两者比例为4:1时,囊体的柔韧性和透明度均较好,厚度均匀,因此确定二氯甲烷一无水乙醇的比例为4:1｡

2.3.2EC质量浓度对囊体成形性的影响

    固定二氯甲烷一无水乙醇的比例为4:l,挥发溶剂的温度为5度,采用不同质量浓度的EC(8%､10%､12%)制备非渗透性囊体,考察其对囊体成形性的影响,结果见表2｡

表2Ec质量浓度对囊体成形性的影响

    胶囊囊皮的柔韧性除与增塑剂有关外,也受到其厚度的影响｡由表可知,EC质量浓度越大,囊壁越厚,硬度随之增加,而柔韧性下降;质量浓度较低时,自身重力大于对囊壁的黏附力,流动性好,使更多的EC向下沉积于胶囊底部,与囊壁相比,底部较厚｡当其为12%时,溶液黏稠,得到的囊体囊壁较厚;为10%时,囊体柔韧性较好,厚度均匀,而且开口圆整｡因此,EC的质量浓度确定为10%｡

2.3.3溶剂挥发温度对囊体成形性的影响

    固定二氯甲烷一无水乙醇的比例为4:1,Ec质量浓度为10%,在不同的温度(一15℃､5℃､25℃)条件下放置24h,挥发溶剂,考察溶剂挥发温度对囊体成形性的影响,结果见表3｡

表3溶剂挥发温度对囊体成形性的影响

    由表可知,当挥发溶剂的温度为5度时,柔韧性及塑性均较理想,囊体厚度均匀,表面光洁,开口圆整,因此溶剂挥发的温度确定为5度｡

2.3.4工艺验证

    单因素考察结果表明,优化的处方工艺为二氯甲烷与无水乙醇的比例4:l,EC质量浓度10%,挥发溶剂温度5℃｡按照上述方法制备3批样品,发现非渗透性囊体透明光洁,厚度均一,硬度及塑性适当,加“2.4”项下制备的柱塞片后,密封性较好｡同法制备非渗透性囊壳,进行渗透性考察‘91,发现溶出实验24h后,亚甲基蓝仍为干燥粉末,而且介质在665nm处无吸收,说明胶囊具有良好的非渗透性｡

2.4柱塞片的制备

    以HPMCK15M为凝胶骨架材料,粉末直接压片法制备柱塞片。将HPMCK15M和乳糖过100目筛,混匀,加入1%硬脂酸镁混匀,冲头直径6.0mm,单冲压片机压片,控制片重100mg,厚度4.1mm,硬度5蚝,分别制备HPMcK15M和乳糖比例为l:4､1:6､1:8和1:10的柱塞片｡

2.5柱塞型脉冲胶囊的制备及体外释药

2.5.1柱塞型脉冲胶囊的制备

    取“2.2”项下冬凌草甲素滴丸,置于“2.3.4”项下非渗透性囊体中,再放入“2.4”项下柱塞片,使其与囊口齐平,并将水溶性囊帽套接,即得｡

2.5.2释放度实验

    按照《中国药典》2010版附录xD中的篮法进行,转速100r/min,温度37℃,释放介质为900mL0.3%SDS,分别于l､2､4､6､8､10､12h取样5mL,0.45岬微孑L滤膜过滤,同时补充5mL介质,取续滤液20mL,按“2.1.1”项下方法测定,根据“2.1.2”项下标准曲线计算质量浓度,求出累积释放度,释药曲线见图2｡

图2HPMCK15M和乳糖比例对脉冲胶囊药物释放的影响

    脉冲释药的释药时滞r,｡为释药10%的时间｡由图可知,随着HPMC和乳糖比例的增大,释药时滞增加｡当两者比例为l:8时,可实现5—6h的释药时滞,从而实现结肠定位释药｡脉冲释药时间｡被用于评价时滞后药物释放的是否快速,图1显示,其均小于3h,说明HPMC和乳糖的比例｡基本没有影响｡同时,也表明脉冲胶囊在时滞后可以快速释药,从而实现较高的局部药物浓度｡

3讨论

    冬凌草甲素难溶于水,制成速释滴丸后测定其溶散时限为12min,可保证时滞后到达结肠部位药物迅速释放,增加局部药物浓度,提高疗效｡当柱塞型脉冲释药胶囊与消化液接触后,囊帽溶解,柱塞片吸水后逐渐溶蚀｡当柱塞片溶蚀至一定程度时,水分进入囊体,药物迅速从囊体内释放,产生一个脉冲式的释药峰,从而达到定时或定位释药的目的‘12｡B1｡非渗透性囊体保证水分不从囊壁渗透进入胶囊内,以免造成药物的溶解而提前释放｡在制备非渗透性囊体的过程中,混合溶剂比例不同,溶剂的溶解性质和挥发速度也不同,导致囊体的透明度､柔韧性等有所差异｡混合溶剂二氯甲烷和无水乙醇都易挥发,如果挥发溶剂的温度升高,则挥发更快,导致Ec质量浓度快速升高,对囊壁的黏附力增大,并滞留在囊口,造成囊口堵塞或不圆整;如果温度过低,溶剂挥发慢,EC质量浓度低,流动性好,使更多的Ec向下沉积于胶囊底部,而且侧壁厚度也是从上向下逐渐加厚｡因此,EC质量浓度主要影响其对囊壁的黏附力和流动性,从而影响囊体的成形性｡

    柱塞片的溶蚀速度决定释药时滞,直接影响药物释放的时间及部位｡柱塞片的处方组成,即乳糖和骨架材料HPMC的比例是影响释药时滞的关键因素｡通过调节处方中HPMC与乳糖的比例,可实现结肠定位所需要的5~6h时滞｡另外,片质量也是重要的影响因素｡预实验中HPMC与乳糖的比例为1:4,最初片质量设定为160mg,结果发现释药时滞大于12h,故将片质量调整为100mg,释药时滞减少为8h｡在此基础上,考察HPMc和乳糖的比例对脉冲释药胶囊释药时滞的影响｡

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